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Résumé
Un nouveau protocole de cryoconservation dans l'azote liquide de cals embryogènes de Picea abies a été établi qui permet de réduire la durée de la phase de latence à moins de 3 jours. La reprise de croissance de différents clones a été étudiée en fonction de certains paramètres: nature et concentration des agents cryoprotecteurs (saccharose, diméthylsulfoxyde, propanediol), température du prérefroidissement et vitesse de réchauffement. La congélation dans l'azote liquide a permis d'obtenir une sélection parmi les différents types cellulaires, seules les cellules des proembryons étant susceptibles de résister. La croissance des cals reprend par la prolifération des proembryons ayant résisté à la congélation. Les cals ayant été conservés dans l'azote liquide présentent un développement plus rapide que les cals témoins et un plus grand nombre d'embryons évoluent ensuite en plantules; les plantules obtenues ont un développement normal.
Summary
A new process for the cryoconservation of Picea abies embryogenic calli has been established which allowed regrowth after lag phase duration lower than 3 days. Regrowth after freezing in liquid nitrogen depends on several parameters: nature and concentration of cryoprotectants (sucrose, dimethylsulfoxide, propanediol), prefreezing temperature and thawing rate. Regrowth occurred directly by proliferation of proembryos. Selection of meristematic cells induced by cryopreservation allowed rejuvenation of senescent cultures. Cryopreserved calli displayed more rapid development of embryos than control. Embryos obtained from frozen calli differenciated in normal plantlets.